呋喃妥因代谢物检测试剂盒各类样本的处理方法分析

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知：

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液：

配液1：0.36M亚硝基铁qing化钾溶液（牛奶、奶粉样本）

11.9g亚硝基铁qing化钾加去离子水至100ml溶解。

配液2：1.04M硫酸锌溶液（牛奶、奶粉样本）

    29.8g硫酸锌加去离子水至100ml溶解。

配液3：0.1M  K₂HPO₄ 溶液

    称11.4g K₂HPO_4?3H₂O加去离子水溶解定溶至500ml。

配液4：1M  HCL

    8.6mL浓HCL加去离子水定容至100mL。

配液5：1M  NaOH溶液

    称取4g NaOH，加去离子水定容至100ml。

配液6：复溶液

    将2×复溶液用去离子水2倍稀释，用于样本的复溶，复溶液在4℃环境可保存一个月。

5.3 样本前处理步骤：

5.3.1 牛奶样本处理方法

1）取5ml样本于离心管中，加250ul 亚硝基铁qing化钾溶液（配液1）振荡混合30秒，加250ul 硫酸锌溶液（配液2）振荡混合30秒，15℃4000转/分离心10分钟；

2）取上清1.1ml，加4ml去离子水、0.5 ml 1M 盐酸溶液和100μl衍生化试剂，振荡5分钟；

3）在37℃过夜孵育(约16小时)或50℃（超过50℃时会影响分层效果）水浴孵育3小时；

4）分别加入5ml 0.1M K₂HPO₄ 溶液，0.4ml 1M NaOH溶液和5ml的乙酸乙酯，振荡5分钟；

5）室温下4000转/分，离心10分钟；

6）取出2.5ml的上层液到另一个离心管中，50-60℃氮气或空气吹干；

7）用1ml正已烷溶解残留物，加入1ml复溶工作液充分振荡混合30秒；室温4000转/分，离心10分钟；

8）去除上层正已烷，取50μl下层液用于分析。

    样本稀释倍数为2    检测下限：0.04ppb

5.3.2 奶粉、蛋粉样本处理方法

1）称取1±0.05g均质样于离心管中，加入4ml去离子水、0.5 ml 1M 盐酸溶液和100μl衍生化试剂，振荡5分钟；

2）在37℃过夜孵育(约16小时)或50℃（超过50℃时会影响分层效果）水浴孵育3小时；

3）加250ul 亚硝基铁qing化钾溶液（配液1）振荡混合30秒，加250ul 硫酸锌溶液（配液2）振荡混合30秒，15℃4000转/分离心10分钟；

4）取全部上清到另一个离心管中，后续接“5.3.1 牛奶样本处理方法，4）”

5.3.3 蜂蜜、组织、肠衣、肝脏、饲料、鸡蛋样本处理方法

1）称取1±0.05g均质样于离心管中，加入4ml去离子水、0.5 ml 1M 盐酸溶液和100μl衍生化试剂，振荡5分钟；

2）后续接“5.3.1 牛奶样本处理方法，3）”

5.3.4 熟食样本处理方法

1）称取1±0.05g均质样于50ml离心管中，加入4.5ml甲醇和0.5ml去离子水，振荡2min，室温4000转/分，离心5分钟，去除全部液体；

2）加入5ml乙氰和5ml正己烷，振荡2min，室温4000转/分，离心5分钟，去除全部液体；

3）在沉淀中加入4ml去离子水、0.5 ml 1M 盐酸溶液和100μl衍生化试剂，振荡5分钟；

    注：熟食的添加回收试验请在此步加入高标准。

4）后续接“5.3.1 牛奶样本处理方法，3）”