孔雀石绿检测试剂盒样本前期处理以及注事事项有哪些？

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知：

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液：

配液1：1×样品复溶液

以100 ml为例，取10 ml 10×复溶液加入50ml去离子水和40ml甲醇，充分混匀。

配液2：1×工作洗涤液

将浓缩洗涤液20倍稀释(1份洗涤液加19份去离子水)。

5.3 样本前处理步骤：

5.3.1 鱼、虾

1）取匀质无骨的样品1 g，加入50 ml离心管中，加入0.3 ml 乙腈、6 ml乙酸乙酯，充分震荡（不少于5分钟，确保鱼肉没有结块）；

2）室温下4000r/min 离心10min，取上清液3 ml加入10ml玻璃试管中，再加入氧化剂50 ul，震荡2分钟；

3）每管加入助溶剂50 ul(不振荡)，50℃水浴环境下氮气吹干（吹完之后管底部应该有一滴液状物，当样本含油脂过高时，此时可见试管底部残留有黄色粘稠状液滴）；

4）加入1 ml 1×样品复溶液，溶解混匀，取50ul用于分析。

    样本稀释倍数：2     检测下限：0.1ppb

6 注意事项

6.1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

6.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

6.3 混合要均匀，洗板要*，在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性。

6.4 在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。

6.5 不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6.6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。

6.7 反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。