一、人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)ELISA试剂盒详细介绍
中文名称:人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)ELISA试剂盒
规格: 48T /96T
品牌:臻科生物
种属:人ELISA试剂盒
检测波长:450 nm
所需样本体积: 50ul
适用范围:仅供科研，不得用于临床诊断。
保存及有效期:2-8℃，六个月
检测样本种类:用于测定血清，血浆及相关液体等样本的含量或者表达。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
臻科生物供应的种属有：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、人、猪牛羊、鸡鸭鹅、植物ELISA试剂盒等
二、实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)水平。用纯化的人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)，再与HRP 标记的活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)浓度。
三、试剂盒组成
1 | 30 倍浓缩洗涤液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶标试剂 | 6ml×1 瓶 | 8 | 标准品（240 pmol/L） | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶标包被板 | 12 孔×8 条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1 瓶 |
4 | 样品稀释液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 说明书 | 1 份 |
5 | 显色剂A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 张 |
6 | 显色剂 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 个 |
四、操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
五、试剂盒计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
六、注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔di一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
七．特别提醒
1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
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