在做ELISA實驗的時候,所采集的標本大多都需要稀釋后才能用來做實驗。有的ELISA試劑盒里說明書上有寫標本的稀釋比例,這樣您就可以直接通過比例進行稀釋,由于沒有經驗可尋,造成新用戶出現無從下手的感覺,今天廠家就帶你去細細的了解下。
ELISA試劑盒標本的稀釋標準:
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。
標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300pg/ml,150pg/ml,75pg/ml,37.5pg/ml,18.5pg/ml,9pg/ml,4.5pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0pg/ml,臨用前15分鐘內配制。
如配制150pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
生物素標記抗體的稀釋原則:
臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。