首先将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

    1.实验开始前，用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。

    2.将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

    3.加样反应：加标准品或样本50ml/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50ml/孔，再加入50ml/孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30分钟。

    4.洗涤：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用工作洗涤液250ml/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

    5.显色：每孔加入底物液A 50ml，再加底物液B 50ml，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟。

    6.终止：每孔加入终止液50ml，轻轻振荡混匀，终止反应。

    7.测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。
 

    氯霉素快速检测试剂盒注意事项

    1.室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

    2.在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

    3.在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。

    4.混合要均匀，洗板要*，在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性。

    5.不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

    6.反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。

    7.显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。