莱克多巴胺检测试剂盒原理及样本前处理

 1. 原理

莱克多巴胺检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测尿样、组织、饲料等样本中的莱克多巴胺（Ractopamine，RAC），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的莱克多巴胺和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含莱克多巴胺含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中莱克多巴胺的残留量。

2.样本前处理

2.1 样本处理前须知：

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

2.2 配液：

配液1：复溶液

    将10×复溶液用去离子水10倍稀释，用于样本的复溶，复溶液在4℃环境可保存一个月。

2.3 样本前处理步骤：

2.3.1 尿样处理方法：

    直接取20µl清亮尿样进行测定（浑浊尿样需要过滤或经4000r/min离心5min，以得到清亮尿样），暂不使用的样本应冷冻保存。

尿样本稀释倍数：1    检测下限：0.1ppb

2.3.2 组织样本处理方法一：

   称取均质后的组织样本2±0.05g ，加入6ml复溶液，充分振荡2min，室温4000r/min以上离心10min (若组织样本中油脂含量较高，可在振荡后放入85℃水浴10min后再离心)。取20µl上清液进行分析。

样本稀释倍数：4    检测下限：0.4ppb

2.3.3 组织样本（肌肉和肝脏）处理方法二：

1）称取均质后的组织样本2±0.05g ，加入8ml乙腈溶液，充分振荡2min，室温4000r/min以上离心10min。

2）取上清液5ml，在56℃条件下氮气或空气流吹至*干燥；

▲肌肉样本：

    加入1ml 复溶液混合振荡30s，取20µl用于分析。

肌肉样本稀释倍数：1    检测下限：0.1ppb

▲肝脏样本：

    加入2ml正己烷振荡溶解，再加入1ml 去离子水混合振荡30s，室温4000r/min以上离心5min，去除上层；取50µl下层与50µl复溶液混匀；取20µl用于分析。

肝样本稀释倍数：2    检测下限：0.2ppb

2.3.4 饲料样本处理方法：

1）称取均质后的饲料样品1.0±0.05g，加入10ml甲醇，再加入5g无水硫酸钠，振荡2min；室温 4000r/min以上离心10min；

2）吸出离心后的上清液1ml，于56℃氮气吹干，用1 ml复溶