小鼠ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠甲状旁腺素(PTH)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠甲状旁腺素(PTH)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，计算样品浓度。

 

　　小鼠ELISA试剂盒样本处理及要求

 

　　1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
 

　　2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
 

　　3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
 

　　注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
 

　　小鼠ELISA试剂盒操作步骤
 

　　1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
 

　　2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
 

　　3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
 

　　4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
 

　　5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
 

　　6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
 

　　7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
 

　　实验结果计算
 

　　以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。